附錄4 氣性壞疽抗毒素效價測定法（小白鼠試驗法）
1 試劑
1.1標準抗毒素
氣性壞疽（威氏、水腫、膿毒、溶組織）標準抗毒素由中國藥品生物制品檢定所按期分發，所標單位應與國際單位等值，標準抗毒素應保存于2～8℃。
1.2毒素
由中國藥品生物制品檢定所分發。亦可自備，但其制法（包括菌種、培養基、培養條件及干燥方法等）應與檢定所分發者相同。試驗用的毒素須以中國藥品生物制品檢定所分發的標準抗毒素準確標定其試驗量（見一覽表），并每3個月復檢1次。使用干燥毒素時，須以精確的分析天平稱取，每次稱取量不得少于10mg，溶解后應一次用完。余存之干燥毒素應封存于裝有干燥劑之真空器皿中。亦可用干燥毒素制成液體甘油毒素，即干燥毒素生理鹽水溶解液與中性甘油（經116℃10分鐘高壓蒸汽滅菌）等量混合，每ml至少含50個試驗量。毒素應保存于2～8℃暗處。
1.3稀釋液
硼酸鹽緩沖鹽水，滅菌后pH值應為7.0～7.4。配方為：
氯化鈉8.5g
硼酸4.5g
硼砂0.5g
蒸餾水加至1000ml，過濾。
2 用具
吸管、容量瓶、注射器應經標化（用雙蒸餾水稱量法或其他準確方法）。吸管、試管、容量瓶應潔凈干燥，注射器及針頭應煮沸消毒。
3 試驗動物
用體重17～19g健康小白鼠。
4 試驗方法
4.1標準抗毒素之稀釋
用稀釋液稀釋標準抗毒素，使每ml含一覽表所示單位。標準抗毒素原液的一次吸取量不應少于0.5ml。
4.2毒素之稀釋
用稀釋液稀釋毒素，使每ml含5個（水腫：20個）毒素試驗量，如一覽表所示。
4.3待檢抗毒素之稀釋
用稀釋液將待檢抗毒素稀釋成數個稀釋度，使每ml約含一覽表所示單位或其上下。稀釋度之間隔約為5%～10%。
4.4混合
4.4.1標準抗毒素對照組
吸取已稀釋之標準抗毒素0.9、1.0、1.1ml分別裝入小試管中，再依次分別補加稀釋液0.6、0.5、0.4ml（可在抗毒素之前加入）。
4.4.2待檢抗毒素試驗組
吸取不同稀釋度之待檢抗毒素各1.0ml分別裝入小試管中，每管補加稀釋液0.5ml（可在抗毒素之前加入）。
以上各管分別加入稀釋毒素1.0ml（水腫：0.5ml），混合均勻，加塞，20～25℃結合1個小時，立即注射。
混合時，吸取標準抗毒素、待檢抗毒素及毒素的吸管不得混用（若不得不用同1支吸管吸取待檢抗毒素，則應由高稀釋度向低稀釋度依次吸取，每更換1稀釋度之前須將吸管內的剩余液吹凈，將吸管外部所沾殘液拭凈，吸取下1稀釋度液到前次吸取的最高處，廢棄之，再于該管內連續吸吹3次，但1支吸管只得用于1份樣品）。
4.5注射
按一覽表所示劑量與余徑，每1稀釋度注射小白鼠4只。
4.6觀察
每天上、下午各觀察試驗動物1次，并記錄發病及死亡情況，連續3天。
4.7結果判定
4.7.1對照動物在3天之內，至少是抗毒素量最少（即0.9ml）的4只中應有2只以上死亡。以對照組動物死亡情況比較待檢抗毒素試驗組動物死亡情況推算待抗毒素的效價。
4.7.2有下列情況之一者應予重試：
（1）對照組動物在3天之內全部死亡或者全無死亡，或者抗毒素量最少的4只動物死亡不足半數，抗毒素量最多的4只動物死亡超過半數。
（2）待檢組動物在3天內全部死亡或者全無死亡。
（3）動物死亡數極不規則，以致無法進行判定。
（4）在一稀釋度的動物中有2只以上屬非特異死亡。
氣性壞疽抗毒素效價測定法一覽表
| 抗毒素種類 | 毒素試驗量 | 稀釋 | 混合 | 注射 | |||||||
| 抗毒素(IU/ml) | 毒素(試驗量/ml) | 抗毒素(ml) | 毒素(ml) | 稀釋液(ml) | 劑量(ml) | 抗毒素(IU) | 毒素(試驗量) | 動物只數 | 途徑 | ||
| 威氏 | L+/5 | 1.0 | 5 | 1.0 | 1.0 | 0.5 | 0.5 | 1/5 | 1 | 4 | 靜脈 |
| 膿毒 | L+ | 5.0 | 5 | 1.0 | 1.0 | 0.5 | 0.5 | 1 | 1 | 4 | 靜脈 |
| 溶組織 | L+/2 | 2.5 | 5 | 1.0 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 1/2 | 1 | 4 | 靜脈 |
| 水腫 | L+/50 | 0.2 | 20 | 1.0 | 0.5 | 0.5 | 0.2 | 1/50 | 1 | 4 | 肌內 |