附錄2 需-厭氧菌無菌試驗培養(yǎng)基靈敏度試驗法
1 菌種
1.1 需氧菌
乙型溶血性鏈球菌(32210株),短芽胞桿菌(7316株)。
1.2厭氧菌
生孢子梭狀芽胞桿菌(64941株)。
以上菌株均由中國藥品生物制品檢定所分發(fā)。
2 培養(yǎng)基
凡應(yīng)用于無菌試驗的培養(yǎng)基(增菌和試驗用)都應(yīng)進(jìn)行靈敏度試驗。
3 操作
3.1 不應(yīng)在同一無菌操作室內(nèi)同時操作2個菌株。
3.2 將菌種接種于適宜的培養(yǎng)基,經(jīng)30~35℃培育一定時間(乙型溶血性鏈球菌和生孢子梭狀芽胞桿菌培育24~48小時,短芽胞桿菌培育18~20小時)后,將乙型溶血性鏈球菌和短芽胞桿菌分別刮入滅菌的生理鹽水內(nèi)制成均勻菌液,生子孢梭狀芽胞桿菌先將菌液吸入滅菌的試管內(nèi),再用滅菌生理鹽水稀釋適宜濃度制成均勻菌液,再將菌液稀釋至與標(biāo)準(zhǔn)比濁管相同之濃度。然后用0.1%蛋白胨水作10倍系列稀釋。
3.3 將10-6~10-8(短芽胞桿菌、生子孢梭狀芽胞桿菌為10-6~10-8,乙型溶血性鏈球菌為10-7~10-9)菌液各1ml分別接種到9ml(用于厭氧菌的培養(yǎng)基在試管中裝置高度不得低于7cm)試驗用培養(yǎng)基中,每個稀釋度至少接種3管,并用未接種的培養(yǎng)基做對照,將接種乙型溶血性鏈球菌、生子孢梭狀芽胞桿菌的培養(yǎng)基,置30~35℃培育3天,接種短芽胞桿菌的培養(yǎng)基培育5天,記錄結(jié)果。
4 結(jié)果判定
以接種后培養(yǎng)基管數(shù)的2/3以上呈現(xiàn)生長的最高稀釋度為該培養(yǎng)基的靈敏度,3次試驗中,以2次達(dá)到的最高靈敏度為判定標(biāo)準(zhǔn)。
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