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Cutbert等發(fā)現(xiàn)缺乏內(nèi)源性和外源性膽固醇時，培養(yǎng)于僅含微量LDL營養(yǎng)液中的人外圍血淋巴細胞，其生長和增生均依賴與細胞膜表面LDL-R的存在，根據(jù)這一原理建立了³H-TdR（³H-thymidine,³H-胸腺嘧啶）摻入法檢測人淋巴細胞LDL-R的活性。楊建新等改進了本法，減少用血量，但是未能避免使用同位素，簡述止法。

檢測原理：細胞分裂增殖所需的大量膽固醇主要通過內(nèi)源性膽固醇合成，以及加速細胞膜LDL-R介導(dǎo)的特異性結(jié)合，攝取血LDL中的外源性膽固醇而獲得，當用mevinolin(膽固醇合成的限速酶HMG-CoA還原酶的抑制劑)阻斷細胞內(nèi)源性膽固醇的合成，并使細胞外環(huán)境中LDL濃度降低至無非特異性外源膽固醇攝取時，細胞分裂生長完全取決與細胞膜表面LDL-R活性，摻入³H-TdR量與細胞生長成正比例關(guān)系。

實驗方法：采空腹靜脈血5～6ml，肝素抗凝，測血漿血脂，并分離出淋巴細胞；將細胞分成實驗組（加含mevinolin的二甲亞礬）和對照組（加不含mevinolin的二甲亞礬），在同樣條件下（50μg/mlPHA，5μg/mlLDL-C，37℃，5%CO₂，飽和濕度）培養(yǎng)96h，分別加入0.5μCi³H-TdR，混勻后繼續(xù)培養(yǎng)6h，收集細胞至玻璃纖維紙上測cpm值。

其計算公式為：

淋巴細胞分裂抑制率（%）=（1-Δcpm實驗組/Δcpm對照組）×100%

采用本法正常淋巴細胞分裂抑制率＜20%；FH雜合子淋巴細胞分裂抑制率＞60%，故可將FH患者與正常人以及普通的高脂血癥區(qū)別開來。

MTT比色法是孟凡青等根據(jù)³H-TdR摻入法為避免使用同位素而改用四甲基偶氮唑鹽（MTT）建立的一種快速、方便的方法。MTT比色法僅需采空腹靜脈血1～2ml，培養(yǎng)90h后，實驗組和對照組分別加入MTT溶液（3mg/ml），再培養(yǎng)2h，抽吸上清，加0.04mol/HCL-異內(nèi)醇，充分溶解，在酶標儀上測吸光度（A）值。詳細操作流程見圖20-2。

圖20-2 MTT比色法檢測LDL-R操作流程

細胞分裂抑制率計算公式為：

淋巴細胞分裂抑制率（%）=（1-ΔA實驗組/ΔA對照組）×100%

正常人淋巴細胞分裂抑制率為0～18%；FH雜合子淋巴細胞分裂抑制率為21%～58%；FH純合子淋巴細胞分裂抑制率為36%～60%。

經(jīng)實驗比較MTT比色法與經(jīng)典的³H-TdR摻入法測定的結(jié)果基本相符，但是后者敏感性更強，可以一步將FH雜合子和FH純合子區(qū)分開來。由于MTT比色法不需使用昂貴的儀器和同位素，用血量少，適合一般實驗室及臨床檢驗科室的臨床診斷，可用于人群FH篩查，這對于減少雜合子之間的婚配，降低FH發(fā)病率有重要意義。