第一節 受體與標記配體的結合分析
為了體外研究脂蛋白的細胞代謝和脂蛋白受體活性，早在1974年Goldstein和Brown就建立了成纖維細胞125I標記LDL的配體-受體結合分析法。其基本原理是：用放射性同位素（常用125I）標記LDL后，與細胞（通常為培養的單層成纖維細胞）、組織或含有LDL-R的制劑一起孵育，使LDL-R與125I-LDL充分結合，形成受體-配體復合物，再除去未結合的125I-LDL，測定結合沉淀物中的放射性。同時檢測細胞、組織或受體制劑的蛋白質含量，即可計算出與125I-LDL結合的LDL-R量。本法由于使用同位素，采樣困難和操作過程繁瑣，且費時、昂貴，故在臨床診斷上難以廣泛開展。
Teupser等于1996年建立了直接熒光法檢測LDL-R，他們采用1，1’二（十八烷基）-3，3‘，3‘，3‘-四甲基吲哚羰基花青高氯酸鹽（1,1‘-dioctadecy1-3,3,3‘，3‘-tetramethylindocarbocyanine perchlorate,DiI）標記LDL，原理與同位素標記LDL相同。其操作步驟見圖20-1。直接熒光法可定量檢測附著的或非附著的各種類型的培養細胞（如正常人或FH病人的皮膚成纖維細胞、淋巴細胞、人U-937和鼠P388D1巨噬細胞系）的LDL-R和清道夫受體，其特點是特異性強，靈敏度高，不使用有機溶劑、不需預先進行脂質抽提，并省去了多步抽提步驟。正常人平均最大結合濃度為10.3±1.1μg/mg細胞蛋白，FH雜合子為5.2±0.8μg/mg細胞蛋白，FH純合子0.9±0.2μg/mg細胞蛋白。
圖20-1 直接熒光法測LDL-R操作步驟
亦有用膠體金標記LDL的，但是在受體-配體結合分析法中，正常人與FH患者的測定值有較明顯的交叉現象，且操作比較繁瑣。
1987年Roach等比較了在硝化纖維素上用125I-LDL、生物素-LDL、生物素-LDL、膠體金-LDL和膠體金-LDL結合銀染四種方法檢測LDL-R，發現膠體金-LDL結合銀染的方法最為敏感，且安全、簡單、快速、便宜。比較結果見表20-1。
表20-1 硝化纖維上檢測LDL-R的幾種方法比較
| 因素 | 125I-LDL | 生物素-LDL | 膠體金-LDL | 膠體金-LDL加銀染 |
| 時間 | 12～24h | 3h | 5～10min | 20min |
| 敏感性 | 1.6fmoles | 1.6fmoles | 1.6fmoles | 193amoles |
| 線性范圍 | 0.5～15μg | 0.5～4μg | 0.5～4μg | 0.06～2μg |