附錄 干擾素效價測定
采用CPE（細胞致病效應）抑制為基礎的抑制微量測定法，以每ml干擾素檢品的最高稀釋度仍能保護半數細胞（50）免受病毒攻擊的稀釋度的倒數定為干擾素單位。以國際單位（IU）表示，并用國家標準品校正結果。
1 細胞培養
將新鮮傳代24～48小時的Wish細胞（人羊膜細胞）以約35萬/ml的濃度另入96孔組織培養板上，每孔100μl，置37℃5%CO2孵箱中培養4～6小時。
2 樣品稀釋與細胞混合
干擾素檢品做4倍系列稀釋，每份檢品做6個稀釋度（如100萬單位，則測4-12～4-7）每個稀釋度加2孔，與培養板中的細胞等量混合，置37℃5%CO25%CO2孵箱培養18～24小時。
3 加病毒
倒掉培養板中的上清液，以100CCID50/ml的濃度加入VSV（水泡性口腔炎病毒），每孔100μl，37℃5%CO2孵箱培養24小時左右。
4 觀察結果
顯微鏡下觀察細胞病變，若病毒對照各孔細胞出現75%～1000%的明顯病變和死亡（變圓、死亡、脫落（，而細胞對照組中的細胞仍生長良好（病變=0），則表明對照系統合格，結果成立。
5 計算
通?？砂碦eed?/FONT>Muench法計算，其步驟如下：
（1）計算保護百分比
| 稀釋度 | 病變平均值（每孔） | 正常平均值（每孔） | 累積數 | 比例 | 百分比（%） | |
| 病變 | 正常 | 正常/病變+正常 | ||||
| 4-1 | 0 | 4 | 0 | 13 | 13/13 | 100 |
| 4-2 | 0 | 3 | 0 | 9 | 9/9 | 100 |
| 4-3 | 1 | 2 | 1 | 5 | 5/6 | 83 |
| 4-4 | 2 | 2 | 3 | 2 | 2/5 | 40 |
| 4-5 | 4 | 0 | 7 | 0 | － | － |
| 4-6 | 4 | 0 | 11 | 0 | － | － |
（2）求出干擾素單位
距離比=（·高于50%的百分數－50）/（高于50%的百分數－低分50%百分數）=（83－50）/（83－40）=33/43=0.77
即此批干擾素稀釋到4-3。77（1∶186）時能保護半數細胞免受攻擊病毒損害。此批干擾素效價為186單位，經國家標準品修正，得出干擾素的國際單位（以IU表示）。
猜您喜歡
推薦典籍